Laporan Praktikum Hb darah

 

LAPORAN PRAKTIKUM

A.   Judul             : Pemeriksaan Hemoglobin Darah

B.   Tujuan

·         Untuk mengetahui cara menentukan kadar hemoglobin (Hb) dalam darah.

·         Untuk mengetahui variasi Hb darah antar mahasiswa.

C.   Prinsip Dasar / Percobaan

Kadar Hb normal pada wanita dewasa adalah 13 – 14,5 gr/100 ml darah, pada pria dewasa 15 – 16 gr/100 ml darah, pada anak-anak 20 gr/100 ml darah dan pada remaja 18 gr/100 ml darah.

D.   Landasan Teori

Hemoglobin adalah molekul protein pada sel darah merah yang berfungsi sebagai media transport oksigen dari paru paru ke seluruh jaringan tubuh dan membawa karbondioksida dari jaringan tubuh ke paru paru. Kandungan zat besi yang terdapat dalam hemoglobin membuat darah berwarna merah.

Kadar hemoglobin dapat ditetapkan dengan berbagai cara, antara lain metode Sahli, oksihemoglobin atau sianmethhemoglobin.

Dasar Penetapan

·         Penetapan Hb metode Sahli didasarkan atas pembentukan hematin asam setelah darah ditambah dengan larutan HCl 0.1N kemudian diencerkan dengan aquadest. Pengukuran secara visual dengan mencocokkan warna larutan sampel dengan warna batang gelas standar. Metode ini memiliki kesalahan sebesar 10-15%, sehingga tidak dapat untuk menghitung indeks eritrosit.

·         Penetapan kadar Hb metode oksihemoglobin didasarkan atas pembentukan oksihemoglobin setelah sampel darah ditambah larutan Natrium karbonat 0.1% atau Ammonium hidroksida. Kadar Hb ditentukan dengan mengukur intensitas warna yang terbentuk secara spektrofotometri pada panjang gelombang 540 nm. Metode ini tidak dipengaruhi oleh kadar bilirubin tetapi standar oksihemoglobin tidak stabil.

·         Metode sianmethemoglin didasarkan pada pembentukan sianmethemoglobin yang intensitas warnanya diukur secara fotometri. Reagen yang digunakan adalah larutan Drabkin yang mengandung Kalium ferisianida (K3Fe[CN]6) dan kalium sianida (KCN). Ferisianida mengubah besi pada hemoglobin dari bentuk ferro ke bentuk ferri menjadi methemoglobin yang kemudian bereaksi dengan KCN membentuk pigmen yang stabil yaitu sianmethemoglobin. Intensitas warna yang terbentuk diukur secara fotometri pada panjang gelombang 540 nm.

Selain K3Fe[CN]6 dan KCN, larutan Drabkin juga mengandung kalium dihidrogen fosfat (KH2PO4) dan deterjen. Kalium dihidrogen fosfat berfungsi menstabilkan pH dimana rekasi dapat berlangsung sempurna pada saat yang tepat. Deterjen berfungsi mempercepat hemolisis darah serta mencegah kekeruhan yang terjadi oleh protein plasma.

           

Nilai Rujukan.

Ø  Bayi baru lahir            : 15.2 - 23.6 gr/dl

Ø  Anak usia 1-3 tahun   : 10.8 - 12.8 gr/dl

Ø  Anak usia 4-5 tahun   : 10.7 - 14.7 gr/dl

Ø  Anak usia 6-10 tahun : 10.8 - 15.6 gr/dl

Ø  Dewasa (Pria)             : 13.2 - 17.3 gr/dl

Ø  Dewasa (Wanita)       : 11.7 - 15.5 gr/dl

Masalah Klinis

·         Penurunan kadar : anemia (defisiensi besi, aplastik, hemolitik, dsb), perdarahan hebat, leukemia, kanker (usus besar, usus halus, rektum, hati, tulang, dsb), thalasemia, penyakit ginjal, penyakit Hodgkin, kehamilan, sarkoidosis, kelebihan cairan intra-vena. Pengaruh obat : antibiotik (kloramfenikol [chloromycetin], penisilin, tetrasiklin), aspirin, antineoplastik, doksapram (dopram), derivat hidantoin, vitamin A dosis besar, hidralazin (Apresoline), indometasin (Indocin), inhibitor MAO, primakuin, rifampin, sulfonamid, trimetadion (Tridione).

·         Peningkatan kadar : dehidrasi/hemokonsentrasi, polisitemia, daerah dataran tinggi, chronic heart failure (CHF), luka bakar yang parah. Pengaruh obat : gentamisin, metildopa (Aldomet)

E.   Alat dan Bahan

Alat :

v  Blood lanset (alat penusuk)

v  Lacing device / pen lanset

v  Haemometer sahli

v  Bengkok

Bahan :

v  Aquades

v  HCl 0,1 N

v  Lar. Klorin

v  Kapal Alkohol

F.    Prosedur / Cara Kerja

a.       Isilah tabung pengencer (tabung sahli) dengan HCl 0,1 N sebanyak 20 mm³

b.      Desinfeksi ujung jari yang akan di infeksi ujung darahnya dengan menggunakan kapas alkohol.

c.       Tusuk ujung jari tersebut dan biarkan darah keluar terlebih dahulu, setelah itu hisap darah yang keluar dengan menggunakan pipet kapiler sampai batas berwarna biru atau sebanyak ± 20 mm³.

d.      Pindahkan darah tersebut kedalam tabung yang akan di isi HCl secara perlahan-lahan dan jaga agar tidak ada gelembung.

e.       Bilaslah pipet beberapa kali dengan menggunakan HCl dalam tabung pengencer hingga tidak ada darah yang tertinggal.

f.       Jika sudah tidak ada yang tertinggal dalam pipet, segera cuci pipet tersebut dengan menggunakan larutan klorin dengan cara menghisap larutan klorin lalu di keluarkan kembali selama beberapa kali, untuk mencegah agar pipet tidak tersumbat.

g.      Encerkan sampel darah tersebut dengan meneteskan aquades sambil dikocok secara perlahan dengan menggunakan pengaduk gelas sampai warna darah dalam tabung sama dengan cairan pada tabung standar.

h.      Setelah warna sampel darah sama dengan warna standar, bacalah skala yang di tunjukan pada tabung pengencer, sehingga di dapatkan konsentrasi hemoglobin dari sampel darah yang diambil.

G.  Hasil Tes

No	Nama	Tekanan Darah	Darah (gr/100 ml)	Larutan HCl (µL)	Kadar Hb (gr/dl)
1	Annisa Junia Ningsih	90/60	0,02	20	14
2	Heri Hermawan	110/90	0,02	20	13
3	Indah Lisma	110/80	0,02	20	14
4	Neng Winwin	120/80	0,02	20	13
5	Melia Wiji Astuti	120/80	0,02	20	12
6	Yastika Pravitasari	110/90	0,02	20	10
Rata-rata					12,66

H.  Pembahasan

Penetapan Hb metode Sahli didasarkan atas pembentukan hematin asam setelah darah ditambah dengan larutan HCl 0.1N kemudian diencerkan dengan aquadest. Pengukuran secara visual dengan mencocokkan warna larutan sampel dengan warna batang gelas standar. Metode ini memiliki kesalahan sebesar 10-15%, sehingga tidak dapat untuk menghitung indeks eritrosit.

Sumber Kesalahan

·         Tidak semua hemoglobin berubah menjadi hematin asam seperti karboksihemoglobin, methemoglobin, sulfahemoglobin.

• Cara visual mempunyai kesalahan inheren 15-30%, sehingga tidak dapat untuk menghitung indeks eritrosit.
• Sumber kesalahan yang sering terjadi :
• Kemampuan untuk membedakan warna tidak sama
• Sumber cahaya yang kurang baik.
• Kelelahan mata
• Alat-alat kurang bersih
• Ukuran pipet kurang tepat, perlu dikalibrasi
• Pemipetan yang kurang akurat
• Warna gelas standar pucat / kotor dan lain sebagainya
• Penyesuaian warna larutan yang diperiksa dalam komparator kurang akurat.

Kesimpulan

Hemoglobin adalah molekul protein pada sel darah merah yang berfungsi sebagai media transport oksigen dari paru paru ke seluruh jaringan tubuh dan membawa karbondioksida dari jaringan tubuh ke paru paru. Kandungan zat besi yang terdapat dalam hemoglobin membuat darah berwarna merah. Kadar hemoglobin dapat ditetapkan dengan berbagai cara, antara lain metode Sahli, oksihemoglobin atau sianmethhemoglobin

Kadar Hb normal Bayi baru lahir : 15.2 - 23.6 gr/dl, pada anak usia 1-3 tahun : 10.8 - 12.8 gr/dl, pada anak usia 4-5 tahun : 10.7 - 14.7 gr/dl, pada anak usia 6-10 tahun : 10.8 - 15.6 gr/dl, pada dewasa (Pria)   : 13.2 - 17.3 gr/dl, dan pada dewasa (Wanita) : 11.7 - 15.5 gr/dl

Masalah Klinis :

·         Penurunan kadar : anemia (defisiensi besi, aplastik, hemolitik, dsb), perdarahan hebat, leukemia, kanker (usus besar, usus halus, rektum, hati, tulang, dsb), thalasemia, penyakit ginjal, penyakit Hodgkin, kehamilan, sarkoidosis, kelebihan cairan intra-vena. Pengaruh obat : antibiotik (kloramfenikol [chloromycetin], penisilin, tetrasiklin), aspirin, antineoplastik, doksapram (dopram), derivat hidantoin, vitamin A dosis besar, hidralazin (Apresoline), indometasin (Indocin), inhibitor MAO, primakuin, rifampin, sulfonamid, trimetadion (Tridione).

·         Peningkatan kadar : dehidrasi/hemokonsentrasi, polisitemia, daerah dataran tinggi, chronic heart failure (CHF), luka bakar yang parah. Pengaruh obat : gentamisin, metildopa (Aldomet).

Daftar Pustaka

-      Sadikin, M. & Jusman, S.W. 1998. Penuntun Praktikum Biokimia. Jakarta ; FKUI Jakarta.

-      Gandasoebrata, R. 2004. Penuntun Laboratorium Klinik. Jakarta ; Dian Rakyat

-      http://hipromater.blogspot.com/2011/02/hemoglobin-darah.html

-      http://patologiklinikku.blogspot.com/2008/05/penetapan-kadar-hemoglobin.html

-      http://labkesehatan.blogspot.com/2009/11/penetapan-kadar-hemoglobin.html

LABORATORIUM KLINIK: PEMERIKSAAN DARAH (BLOOD ANALYSIS)

PENGAMBILAN SPESIMEN

• Alat: pipet, spuit, lancet, tourniquet, kapas alkohol 70%
• Wadah: tertutup, bersih, kering, berlabel

Cara pengambilan:

• Dewasa: ujung jari tengah, manis
• Anak: tumit, ibu jari kaki bag pinggir
• Darah vena: vena cubiti

Antikoagulan:

• EDTA (Ethylene Diamine Tetra Acetate) → 1½ mg/ml
• Larutan Oxalat → 0,2 ml/ml darah

PEMERIKSAAN HEMOGLOBIN METODE SAHLI

• Prinsip: Hb → asam hematin (oleh HCl) → warna as hematin dibandingkan dengan standart
• Tujuan: menetapkan kadar Hb dlm darah
• Reagen: lar HCl 0,1N, aquadest

Alat:

1. Gelas berwarna sbg standart
2. Tabung hemometer
3. Pengaduk dari gelas
4. Pipet Sahli, pipet Pasteur
5. Kertas saring

Cara pemeriksaan:

• Tab hemometer diisi lar HCl 0,1N → sampai tanda 2
• Hisap darah kapiler dng pipet Sahli smpi tanda 20 μl
• Hapus kelebihan darah dng kertas tisu
• Masukan darah kedalam tabung hemometer
• Bilas darah dengan larutan HCl didlm tabung

Cara pemeriksaan:

• Tunggu 5 menit → pembentukan as. Hematin
• Tambah aquadest → sampai warna sama dengan standart → baca dalam gr/dl

Nilai Normal:

• Laki-laki: 14 – 18 gr/dl
• Wanita : 12 – 16 gr/dl

PEMERIKSAAN HITUNG LEUKOSIT

• Prinsip: darah diencerkan dan dicat dengan larutan Turk → lalu dihitung jumlah leukosit dalam volume tertentu
• Tujuan: menghitung jumlah lekosit dalam darah
• Alat yg digunakan:

1. Pipet leukosit
2. Kamar hitung (Improved Neubauer)
3. Mikroskop
4. Counter tally
5. Reagen: Larutan Turk

Cara pemeriksaan:

• Hisap darah EDTA dng pipet lekosit → sampai tanda 0,5
• Hapus kelebihan darah dng kertas tisu
• Hisap lar. Turk sampai tanda 11

• Kocok darah dan larutan ± 2 – 3 menit
• Buang lar 3 – 4 tetes → masukan kedalam kamar hitung
• Hitung leukosit dengan mikroscop → lap 1,3,7,9 → hasil x 50
• Nilai Normal: 5.000 – 10.000 / mm3

PEMERIKSAAN HITUNG ERITROSIT

• Prinsip: darah diencerkan dan dicat dengan larutan Hayem → lalu dihitung jumlah eritrosit dalam volume tertentu
• Tujuan: menghitung jumlah eritrosit dalam darah
• Alat yg digunakan:

1. Pipet eritrosit
2. Kamar hitung (Improved Neubauer)
3. Mikroskop
4. Counter tally

• Reagen: Larutan Hayem

Cara pemeriksaan:

• Hisap darah EDTA dng pipet eritrosit → sampai tanda 0,5
• Hapus kelebihan darah dng kertas tisu
• Hisap lar. Hayem sampai tanda 101

• Kocok darah dan larutan ± 2 – 3 menit
• Buang lar 3 – 4 tetes → masukan kedalam kamar hitung
• Hitung leukosit dengan mikroscop → lap A, B, C, D dan E → hasil x 10.000

Nilai Normal:

• Pria : 4,5 – 5,5 juta/ mm3
• Wanita : 4 – 5 juta/ mm3

PEMERIKSAAN HITUNG TROMBOSIT

• Prinsip: darah diencerkan dan dicat dengan larutan Rees Echer → lalu dihitung jumlah trombosit dalam volume tertentu
• Tujuan: menghitung jumlah trombosit dalam darah
• Alat yg digunakan:

1. Pipet eritrosit
2. Kamar hitung (Improved Neubauer)
3. Mikroskop
4. Counter tally

• Reagen: Larutan Rees Ecker

Cara pemeriksaan:

• Hisap darah EDTA dng pipet lekosit → sampai tanda 0,5
• Hapus kelebihan darah dng kertas tisu
• Hisap lar. Rees Echer sampai tanda 101

• Kocok darah dan larutan ± 2 – 3 menit
• Buang lar 3 – 4 tetes → masukan kedalam kamar hitung
• Hitung trombosit dengan mikroscop → lap 1,3,7,9 → hasil x 500
• Nilai Normal: 150.000 – 400.000 / mm3

PEMERIKSAAN LAJU ENDAP DARAH (LED)

• Prinsip (Cara Westergren) →darah EDTA didiamkan dlm waktu tertentu, maka sel sel darah akan mengendap
• Tujuan: Untuk mengetahui kecepatan eritrosit mengendap dalam waktu tertentu
• Alat yang digunakan:

1. Tabung Westergren
2. Rak Westergren
3. Penghisap
4. Pencatat waktu
5. Pipet berskala
6. Spuit 5cc
7. Botol kecil

• Reagen: Natrium sitrat 3,8%

Cara Pemeriksaan:

• Sediakan botol yang telah diberi 0,4cc Na Sitrat 3,8%
• Hisap darah vena 1,6cc dan masukan kedalam botol yg telah diisi Na sitrat 3,8%
• Campur baik-baik
• Hisap campuran tsb kedlm tab Westergren → sampai tanda 0
• Biarkan pipet tegak lurus dalam rak Westergren
• Baca tingginya plasma selama 1 dan 2 jam

Nilai Normal

• Laki-laki : 0 – 10 mm/jam
• Wanita : 0 – 20 mm/jam

PEMERIKSAAN HITUNG JENIS LEUKOSIT

• Prinsip: terdapat perbedaan daya serap terhadap zat asam
• Tujuan: menghitung jumlah tiap-tiap jenis leukosit dalam darah
• Alat yang digunakan:

1. Mikroskop
2. Obyek glass
3. Lancet steril
4. Pencatat waktu
5. Rak pengecatan
6. Rak pengering
7. Minyak imersi
8. Kaca penggeser
9. Pinsil kaca

Reagen:

• Larutan Wright
• Larutan buffer pH 6,4

Cara Pemeriksaan

• Buat hapusan darah tepi
• Cat hapusan dengan lar. Wright → 2 menit
• Tetesi dengan lar buffer sama banyak → selama 5 menit
• Siram dengan aquadest
• Keringkan dan baca dengan mikroskop

Harga Normal:

1. Eosinofil : 1 – 3 %
2. Basofil : 0 – 1 %
3. Batang : 2 – 6 %
4. Segmen : 50 – 70 %
5. Limfosit : 20 – 40 %
6. Monosit : 2 – 8 %

PEMERIKSAAN GOLONGAN DARAH ABO

• Prinsip: aglutinasi sel darah merah dengan anti serum tertentu
• Tujuan: untuk mengetahui golongan darah seseorang
• Alat yang diperlukan:

1. Obyek glass
2. Lancet
3. Kapas alkohol

Reagen:

• Serum anti A, Serum anti B, Serum anti AB

Cara Pemeriksaan:

• Taruh pada masing-masing obyek glass serum anti A, B dan AB
• Tetesi serum dengan darah dan aduk
• Lihat penggumpalan yang terjadi

Hasil:
GOL. DARAH ANTI A ANTI B
A      +      -
B      -      +
AB       +      +
O      -      -

WAKTU PERDARAHAN
(BLEEDING TIME)

Prinsip :

• Ialah pemeriksaan terhadap fungsi pembuluh darah (kapilaria) jumlah dan fungsi trombosit (ekstrinsik faktor)

Cara Pemeriksaan

• Cuping telinga ditusuk pinset → dihitung sampai darah berhenti

Harga Normal : 1 – 7 menit

WAKTU PEMBEKUAN
(CLOTING TIME)

Prinsip :

• Dengan pemeriksaan waktu pembekuan dapat dilihat adanya kelainan / kekurangan dari faktor intrinsik

Cara pemeriksaan

• Darah dimasukan tabung reaksi → dihitung waktunya sampai beku

Harga Normal : 5 – 15 menit

PEMERIKSAAN PAPANICOLAOU SMEAR

Prinsip :

• Mendeteksi adanya sel sel ganas pada hapusan sekret vagina / servik

Cara Pemeriksaan:

• Px tidak boleh irigasi vagina, memasukan obat pervagina, tidak coitus 24 – 48 jam sebelumnya
• Pemeriksaan dilakukan diantara waktu mens dengan posisi litotomi
• Dengan spekulum, ambil permukaan servik dengan spatula → bahan difiksasi dlm obyek glass

Hasil:

1. Kelas 1: tidak ada sel atipikal/abnormal
2. Kelas 2: sel atipikal, tidak terbukti maligna
3. Kelas 3: dugaan, tp tdk disimpulkan maligna
4. Kelas 4: dugaan kuat maligna
5. Kelas 5: kesimpulan maligna

PEMERIKSAAN JAMUR

Prinsip :

• Larutan KOH 10 % atau 20 % akan melisiskan kulit, rambut, kuku sehingga bila mengandung jamur akan terlihat adanya Hypha atau spora

Cara pemeriksaan: dilihat dibawah mikroskop

PEMERIKSAAN SEREBRO SPINAL

• Cairan serebro spinal diperoleh dari lumbal pungsi pada ruang antar lumbal L3-4 atau L4-5.
• Tekanan pertama diukur, kemudian cairan diaspirasi dan dimasukan dalam tabung pemeriksaan yang steril.
• Data analisa cairan spinal sangat penting dalam mendiagnosa penyakit medulla spinalis dan otak

Volume :

• Bayi : 40 – 60 ml
• Anak : 80 – 120 ml
• Dewasa : 100 – 160 ml

S el Darah
     Putih / mm3      Merah / mm3
Neonatus      0.15       0.5
Anak      0.10      0.1
Dewasa      0.5      0.1

Chlorida :

• Neonatus : 108 – 122 mmol / l
• Dewasa : 112 – 130 mmol / l

Glukosa :

• Neonatus : 1.1 – 2.2 mmol / l
• Bayi/anak : 3.9 – 5.0 mmol / l
• Dewasa : 2.8 – 4.4 mmol / l

• Protein Total : 15 – 45 mg / 100 ml
• Albumin : 52 %
• Alpha 1 globulin : 5 %
• Alpha 2 globulin : 14 %
• Beta globulin : 10 %
• Gamma globulin : 19 %

REFERENSI

1. Harper, Rodwell, Mayes, 1977, Review of Physiological Chemistry
2. Colby, 1992, Ringkasan Biokimia Harper, Alih Bahasa: Adji Dharma, Jakarta, EGC
3. Wirahadikusumah, 1985, Metabolisme Energi, Karbohidrat dan Lipid, Bandung, ITB
4. Harjasasmita, 1996, Ikhtisar Biokimia Dasar B, Jakarta, FKUI
5. Toha, 2001, Biokimia, Metabolisme Biomolekul, Bandung, Alfabeta
6. Poedjiadi, Supriyanti, 2007, Dasr-Dasar Biokimia, Bandung, UI Press

diposkan oleh dr. Suparyanto, M.Kes